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基因组DNA的分离纯化提取方法讲解

[2019/7/31]

基因组DNA的分离纯化提取方法讲解

DNA的提取是分子生物学研究的基础技术,提取的DNA的纯度及结构完整性是进行基因工程各项研究所必需的条件。归纳基因组DNA提取的各个环节.

同时对DNA提取过程中的常见问题、原因及应对策略作简要的分析综述。


实验的一般步骤为

1.破碎细胞.

2.DNA的提取

3.DNA的纯化

第一步中破碎细胞常用有三种方法

①机械法:主要通过机械切力的作用使组织细胞破碎的方法。

本实验常用的器械有玻璃匀浆器。将剪碎的组织置于管中,再

套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎。匀浆器的研

钵磨球和玻璃管内壁之间间隙保持在十分之几毫米距离。此法

细胞破碎程度较高,适用于量少和动物脏器组织。②化学法:有些化学药品可以改变细胞膜的通透性从而使内合物

有选择地渗透出来。例如某些有机溶剂(如苯、甲苯)、抗生

素、表面活性剂、金属螯合剂、变性剂等。

实验中常用GA缓冲液,GA缓冲液中含有表面活性剂可以打开

细胞的磷脂双分子层,增加通透性。且GA缓冲液是低渗溶液,细

胞易吸水涨破,达到更好打开细胞的效果。

特点:作用比较温和

存在的问题:作用时间长,效率低;化学试剂毒性较强,同

时对产物也有毒害作用,进一步分离时需要用透析等方法除去这

些试剂。

③酶解法:利用各种水解酶,破碎细胞将细胞内含物释放出来。

常用蛋白酶K和十二烷基硫酸钠(SDS)消化破碎细胞。

此种方法的特点是:适用范围广;作用条件温和;内含物成分不

易受到破坏。但其成本高,限制了大规模的利用且耗时较长。

以上三种破碎细胞的方法可结合使用,使细胞破碎完全,利于接

下来的步骤。

第二步中DNA的提取有两种方法:

①沉淀法

实验常采用异丙醇或无水乙醇快速提取DNA

一般经典酒精标本DNA提取方法都会加入蛋白酶K,且在56℃条件下消化3h以上,以达到组织中蛋白质的完全消化。

得到的提取液经RNA酶处理,酚、氯仿和异戊醇反复抽提,即可得较纯的DNA产物。


好了,以上就是小编为大家分享的有关“基因组DNA的分离纯化提取方法”的一些信息,希望对各位科研人员有所帮助。


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